基本信息
貨號：22204
儲存條件：-20℃避光干燥
保質(zhì)期：自收到起6個月
簡介
盡管JC-1在許多實驗室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應(yīng)用中難以使用。即使在1μM濃度下，JC-1也傾向于在水性緩沖液中沉淀。當需要高染料濃度時，JC-10已被開發(fā)為JC-1的替代物。與JC-1相比，我們的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能夠選擇性地進入線粒體，并隨著膜電位的增加可逆地將其顏色從綠色變?yōu)槌壬?。這種性質(zhì)是由于膜極化時JC-10聚集體的可逆形成導(dǎo)致發(fā)射光從520nm（即JC-10單體形式的發(fā)射）轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>570nm（即J-聚集體形式的發(fā)射）。當在490nm激發(fā)時，隨著線粒體膜變得更加極化，JC-10的顏色從綠色橙色可逆地變?yōu)榫G色橙色。使用通常安裝在所有流式細胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色。可以在熒光通道1（FL1）中分析綠色發(fā)射，在通道2（FL2）中分析綠色橙色發(fā)射。除了用于流式細胞儀外，JC-10還可用于熒光成像。我們已經(jīng)開發(fā)出一種在熒光微孔板平臺中使用JC-10的方案。在一些細胞系中，JC-10具有甚至優(yōu)于JC-1的性能。
物理化學(xué)特性
分子量：~600
儲存方式：DMSO
Ex=515nm
Em=529和527nm
JC-10的分析方案
簡要概括
準備含有測試化合物的細胞®
添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）®
在室溫或37 ℃孵育1小時®
在Ex讀取熒光強度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm
注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 該協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。
操作步驟
1. 準備JC-10工作溶液：
1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶應(yīng)儲存在<-20℃。注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，并避光.
1.2準備1X JC-10工作溶液：在實驗當天，解凍一份JC-10 stockolution到室溫。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7-8，含0.02％Pluronic [表情] F-127）中制備10至30μM1X工作溶液。通過votexing將它們混合均勻。注意：對于某些細胞系，pH值為8的工作溶液可能會阻止JC-10泄漏。
2.用熒光酶標儀進行JC-10檢測：
2.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導(dǎo)細胞凋亡。 對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。
2.2將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（來自步驟1.2）加入到細胞板中。
2.3將JC-10加載板在37 oC，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15-60分鐘。
注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
2.4監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的熒光變化，進行比率分析。
可選：從板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細胞板中。
3.用熒光顯微鏡或流式細胞儀進行JC-10檢測：
3.1用測試化合物處理細胞一段所需的時間（例如，Jurkat細胞可以用喜樹堿處理4-6小時）以誘導(dǎo)細胞凋亡。
3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。
3.3將細胞重懸于500μLJC-10工作溶液中（來自步驟1.2）。
3.4在室溫或37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育10至30分鐘，避光。
注意：適當?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
3.5使用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC過濾器）或流式細胞儀（使用FL1和FL2通道）監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm處的熒光變化。可選：移除JC-10工作 從板上解決; 在熒光顯微鏡下分析之前，將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細胞板中。