D-蟲熒光素是螢火蟲熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng)，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及**計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)?？膳c小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)配套使用，用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)活體熒光檢測(cè)。
(1)用無菌水配置200×的D-Luciferin儲(chǔ)備液(30mg/mL)，立即使用，或-20℃保存。
(2)用預(yù)熱好的完全培養(yǎng)基1∶200稀釋D-Luciferin儲(chǔ)備液，配置工作液(150μg/mL)。
(3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。
(4)進(jìn)行圖像分析前，向細(xì)胞中添加1× 的D-Luciferin工作液，進(jìn)行圖像分析。
(5)溶解D-Luciferin時(shí)要完全。
(6)在圖像分析前，將細(xì)胞進(jìn)行37℃的短時(shí)間培養(yǎng)可以增加信號(hào)強(qiáng)度。
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