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技術文章

鈣離子熒光探針Fluo4有哪些注意事項

    Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物,是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-4 AM的熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-4 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4,從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-4可以和鈣離子結(jié)合,結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光,激發(fā)波長為494nm,發(fā)射波長為516nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右,發(fā)射波長為512-520nm。

    1. Fluo-4 AM遇水極易分解,建議**次使用時,母液分裝并密封保存,同時注意保持干燥。
    2. Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
    3. 探針的工作濃度、細胞量、孵育溫度和時間等需要根據(jù)不同實驗預先摸索。
    4. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

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